Мікробіологічний метод заснований на здатності термофільних стрептококів у процесі своєї життєдіяльності змінювати кислотність середовища, в якому вони розвиваються, що фіксується за допомогою рН-індикатору. Первинно стрептококи, які поміщені у поживне середовище з індикатором, знаходяться у стані анабіозу. В процесі інкубування тесту зі зразком молока вони «прокидаються» та міняють рН середовища, на що реагує індикатор зміною кольору.
Якщо у зразку молока знаходяться інгібітори, у тому числі антибіотики, сульфаніламіди, хлорамфенікол та багато інших, стрептококи гинуть не змінюючи реакцію середовища та, відповідно, не змінюючи його колір. Таким чином, зміна кольору тесту свідчить про відсутність інгібіторів у зразку, та навпаки, якщо колір залишився без змін – про забруднення молока антибіотиками або іншими інгібіторами.